Dissertação de Mestrado #590: Ludmila Leroy
Expressão, cristalização e determinação estrutural de macromoléculas biológicas por difração de raios X por monocristal
Autor: Ludmila Maria Diniz Leroy
Banca Avaliadora
Carlos Basílio Pinheiro (orientador)
Física - UFMG
Angelo Malachias de Souza
Física - UFMG
Ubirajara Agero Batista
Física - UFMG
Orientadores
Carlos Basílio Pinheiro (orientador)
Departamento de Física
Ronaldo Alves Pinto Nagem (coorientador)
ICB/UFMG
Resumo do Trabalho
Expressão, cristalização e determinação estrutural de macromoléculas biológicas por difração de raios X por monocristal
A dissertação intitulada “Expressão, cristalização e determinação estrutural de macromoléculas biológicas por difração de raios X por monocristal” reporta o trabalho realizado pela aluna Ludmila Maria Diniz Leroy durante seu mestrado, sob orientação do Prof. Dr. Carlos B. Pinheiro e co-orientação do Prof. Dr. Ronaldo A. P. Nagem. Nesse trabalho, todas as etapas envolvidas na determinação da estrutura de uma proteína por cristalografia foram visitadas. Essas etapas incluem expressão proteica por um vetor (bactéria), a purificação e a cristalização da proteína, experimentos de difração de raios X por monocristal (XRD), processamento de dados, solução da estrutura e análises do modelo proposto. Para realizar todas as etapas, três proteínas foram estudadas: uma efingomielinase D (SMase D), o domínio E2 do papiloma vírus bovino tipo 1 (E2 de BPV-1) e o complexo NahK/NahL. O trabalho com cada uma das proteínas cobriu partes distintas do processo de determinação estrutural. Foi feita a expressão, purificação, cristalização e experimentos de XRD com cristais da SMase D; a estrutura atômica do domínio E2 de BPV-1 foi elucidada a partir de dados de XRD e o modelo foi devidamente analisado; e os dados de XRD de um cristal de NahK/NahL, que indicaram uma desordem no mapa de densidade eletrônica experimental, foram devidamente reprocessados e analisados de tal forma que um novo modelo para a estrutura do complexo foi proposto.