Dissertação de Mestrado #590: Ludmila Leroy

Expressão, cristalização e determinação estrutural de macromoléculas biológicas por difração de raios X por monocristal

Autor: Ludmila Maria Diniz Leroy

Banca Avaliadora

Carlos Basílio Pinheiro (orientador)

Física - UFMG

Angelo Malachias de Souza

Física - UFMG

Ubirajara Agero Batista

Física - UFMG

Orientadores

Carlos Basílio Pinheiro (orientador)

Departamento de Física

Ronaldo Alves Pinto Nagem (coorientador)

ICB/UFMG

Resumo do Trabalho

A dissertação intitulada “Expressão, cristalização e determinação estrutural de macromoléculas biológicas por difração de raios X por monocristal” reporta o trabalho realizado pela aluna Ludmila Maria Diniz Leroy durante seu mestrado, sob orientação do Prof. Dr. Carlos B. Pinheiro e co-orientação do Prof. Dr. Ronaldo A. P. Nagem. Nesse trabalho, todas as etapas envolvidas na determinação da estrutura de uma proteína por cristalografia foram visitadas. Essas etapas incluem expressão proteica por um vetor (bactéria), a purificação e a cristalização da proteína, experimentos de difração de raios X por monocristal (XRD), processamento de dados, solução da estrutura e análises do modelo proposto. Para realizar todas as etapas, três proteínas foram estudadas: uma efingomielinase D (SMase D), o domínio E2 do papiloma vírus bovino tipo 1 (E2 de BPV-1) e o complexo NahK/NahL. O trabalho com cada uma das proteínas cobriu partes distintas do processo de determinação estrutural. Foi feita a expressão, purificação, cristalização e experimentos de XRD com cristais da SMase D; a estrutura atômica do domínio E2 de BPV-1 foi elucidada a partir de dados de XRD e o modelo foi devidamente analisado; e os dados de XRD de um cristal de NahK/NahL, que indicaram uma desordem no mapa de densidade eletrônica experimental, foram devidamente reprocessados e analisados de tal forma que um novo modelo para a estrutura do complexo foi proposto.