Dissertação de Mestrado #515: Thiago Francisco

A técnica de difração de raios X é a principal ferramenta de investigação da estrutura de proteínas. No entanto, o processo de cristalização tem sido o grande gargalo para a utilização desta técnica. Os protocolos de cristalização utilizados atualmente consistem em obter amostras por tentativa e erro, desprezando diversos parâmetros físicos. O objetivo do presente trabalho foi estudar os efeitos da temperatura no processo de cristalização de proteínas. Foram realizados ensaios de cristalização com a proteína lisozima em diferentes temperaturas nos quais foram observados uma dramática mudança de regime de crescimento, com impacto sobre o número e tamanho médio de cristais obtidos para a temperatura de aproximadamente 12oC. Foram realizados ensaios de cristalização com monitoramento in situ pela técnica de Espalhamento Dinâmico de Luz (DLS). Esta técnica permitiu determinar o tamanho médio das partículas em solução durante a cristalização. Os resultados obtidos indicam que a temperatura não altera a evolução temporal das raios das partículas e que a quantidade de partículas em solução é maior para temperaturas mais baixas. Cristais obtidos em diferentes temperaturas foram analisados utilizando difração de raios X e as estruturas obtidas não apresentaram nenhuma mudança relevante. Ainda há lacunas nas teorias que descrevem a dinâmica do processo de cristalização de proteínas que justificam estudos posteriores sobre este fenômeno para a elaboração de protocolos de cristalização mais assertivos.